海带中褐藻糖胶的超声提取工艺的优化(2)

　　海带购自广州市清平市场，经中科院南海海洋研究所钟红茂研究员鉴定为海带目海带科的一种大型褐藻Laminaria japonica Aresch，晒干后粉碎至40目备用。葡萄糖对照品(分析纯，纯度≥99%,广州汕头市西陇化工厂)。实验用试剂均为分析纯。

　　2方法

　　2.1葡萄糖对照品溶液的制备

　　精密称取葡萄糖对照品50.0 mg，置100 mL容量瓶中，加入蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL中含葡萄糖0.500 mg)。

　　2.2标准曲线的制备

　　分别精密吸取上述葡萄糖对照品溶液1.0、20、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、10.0、12.0 mL至50 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取2.0 mL于试管中，于冰水浴条件下缓慢加入5%(质量分数)苯酚溶液1.0 mL，摇匀，迅速加入浓硫酸溶液5.0 mL，振摇5 min，沸水浴15 min，然后置冷水浴中冷却20 min。取1.0 mL蒸馏水，加等量苯酚和浓硫酸,同法操作,作为空白溶液,在 490 nm处测量其吸光度值。以葡萄糖的质量浓度(ρ)为横坐标,溶液的吸光度值(A)为纵坐标，绘制标准曲线。经回归分析，得标准曲线方程：A=26.894ρ+0.030 2，r=0.999 7葡萄糖的质量浓度在0.002 5～0.030 0 mg·mL-1范围内与吸收值线性关系良好。

　　2.3海带褐藻糖胶提取液的制备

　　取海带粉末(40目)5.0 g，按试验要求以不同超声提取时间、超声功率、固液比和提取温度进行提取，得到的上清液浓缩至体积为原来的1/3，加入3倍体积的95%(体积分数)乙醇，离心，得到的沉淀用丙酮洗涤，得到褐藻糖胶粗品。将粗品溶于蒸馏水中，减压抽滤，将滤液转移入100 mL的容量瓶中，定容,即得。

　　2.4褐藻糖胶的提取量的计算

　　按下列公式计算褐藻糖胶的提取量：EY=x1(mg)x0(g)式中：EY为海带中褐藻糖胶的提取量(mg·g-1)，x0为提取前海带粉末的质量(g)，x1为提取物中褐藻糖胶的质量(mg)。

　　2.5单因素试验

　　2.5.1超声提取温度的影响

　　称取含海带粉末50 g、固液比为1∶20的样品溶液，分别在30、40、50、60 ℃的水浴，以320 W的功率超声30 min，其他步骤同“2.3”。随着温度的升高，褐藻糖胶的提取量迅速增大，当温度升高到50 ℃时，提取量的增大速度减慢，直至趋于平衡。故褐藻糖胶的提取应控制在一定的温度范围内。

　　2.5.2超声功率的影响称取含海带粉末5.0 g、固液比为1∶20的样品溶液，于40 ℃的水浴中，以200、240、280、320、360、400 W功率分别超声30 min，其他步骤同“2.3”。在超声功率为200~320 W范围内，褐藻糖胶的提取量随超声功率的提高而增大，在功率为320 W时，提取量达到峰值。

　　2.5.3超声提取时间的影响称取含海带粉末50 g、固液比为1∶20的样品溶液，在40 ℃的水浴中，以320 W的功率分别超声10、20、30、40、50、60 min，其他步骤同“2.3”。在提取时间为30 min时，提取量达到最大值32 mg·g-1。此后随着时间的延长，提取量反而减小。

　　2.5.4固液比的影响称取含海带粉末5.0 g、固液比分别为1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30、1∶35、1∶40的样品溶液，在40 ℃的水浴中，以320 W的功率超声30 min， 其他步骤同“2.3”。 在固液比为 1∶20~1∶30的范围内，提取量迅速增大，曲线的斜率明显增大。但在1∶30~1∶40的范围内，褐藻糖胶提取量的增大趋于平缓。

　　2.6正交试验