谈北豆根提取物中有效成分分析方法的建立
2013-12-11 01:16
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摘要： 目的采用酸性染料比色法测定北豆根提取物中北豆根总
摘要： 目的采用酸性染料比色法测定北豆根提取物中北豆根总碱（ＴＡＭＤ）的含量，采用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法测定蝙蝠葛碱（Ｄａｕｒｉｃｉｎｅ）的含量。方法溴甲酚绿在无水甲醇（ｐＨ ＝６）中，可与ＴＡＭＤ 直接络合生成绿色化合物，用于比色测定，最大吸收波长为６２０ ｎｍ。ＨＰＬＣ 法，色谱柱：Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｃ１８ 柱；流动相：乙腈∶水∶磷酸＝１６∶８４∶０．１５；流速：０．５ ｍｌ·ｍｉｎ－１ ；检测波长：２０８ ｎｍ。结果酸性染料比色法：线性范围为６ ～４０ μｇ· ｍｌ－１ ，r ＝０．９９９ ８ （n ＝７），平均加样回收率为９９．１８％，RSD ＝０．７４％；ＨＰＬＣ 法：线性范围为０．０１ ～０．１ ｍｇ· ｍｌ－１ ，r ＝０．９９９ ８（n ＝７） ，平均加样回收率为９８．３２％， RSD＝０．９４％。结论建立的方法灵敏、准确、重现性好，可作为北豆根提取物中ＴＡＭＤ 和蝙蝠葛碱的含量分析方法。
关键词： 北豆根总碱 蝙蝠葛根 酸性染料比色法 高效液相色谱法
北豆根为防己科植物蝙蝠葛Menispermum dauricum ＤＣ．的干燥根茎，其有效部位是生物碱。现已知北豆根中含有近２０ 种生物碱，总碱含量可达１％以上，其中含量最高的生物碱为蝙蝠葛碱，其含量约占总生物碱的５０％左右［１］ 。北豆根总碱（ＴＡＭＤ）对呼吸道致病菌有抑菌作用，尤其对肺炎球菌效果更为显著。其制剂北豆根片可治疗急性咽炎、扁桃体炎，经过多年的临床应用已收入２００５ 版《中国药典》。２００５ 版《中国药典》用酸碱滴定法控制含量，终点不易判断，误差大。本实验采用酸性染料比色法测定提取物中ＴＡＭＤ 的含量，采用高效液相色谱法测定提取物中蝙蝠葛碱的含量，从而用这两个指标控制提取物的质量。
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１ 器材
ＨＰ －８４５３ 紫外－可见分光光度计；ＡＧ －２５４ 型电子分析天平（瑞士梅特勒）；ＷＴ －０２ 型电热恒温干燥箱（北京恒星医疗器械厂）；ＺＦＱ －８５Ａ 型旋转蒸发仪（上海医械专机厂）；Ｒ２００２ 型旋转蒸发仪（上海申顺科技公司）；ＪＡＳＣＯ 高效液相色谱仪（ＵＶ －１５ 紫外－可见检测器，ＲＵ －１５８０ 泵，ＣＫＣｈｏｍ 色谱工作站，日本）；北豆根饮片（市售，承德产，经鉴定为蝙蝠葛）；北豆根碱（对照品，自制，含量９９．０％）；９５％乙醇、氨水、硫酸、三氯甲烷、无水甲醇、磷酸、酚酞为分析纯； 甲醇、乙腈为色谱纯。
２ 方法与结果
２．１ 酸性染料比色法测定提取物中ＴＡＭＤ 的含量［２］
２．１．１ 比色原理不吸收可见光的无色物质通过络合、氧化还原等反应生成有色物质，可用于比色测定。实验证明，溴甲酚绿在无水甲醇（ｐＨ ＝６）中，可与ＴＡＭＤ 直接络合生成绿色化合物，用于比色测定。
２．１．２ 最大吸收波长的选择精密称取蝙蝠葛碱对照品（６０℃干燥至恒重）１０．０ ｍｇ 置５０ ｍｌ 容量瓶中，加无水甲醇溶解，最后用无水甲醇定容至５０ ｍｌ，作为对照品溶液。
精密吸取对照品溶液１．０ ｍｌ 置１０ ｍｌ 容量瓶中，加入０．１％溴甲酚绿溶液０．２ ｍｌ，用无水甲醇定容，在２００ ～７００ ｎｍ 进行扫描，选择最大吸收波长，确定最大吸收波长为６２０ ｎｍ。
２．１．３ 显色剂用量的考察分别精密吸取０．１％溴甲酚绿溶液０．１，０．２，０．３，０．４，０．５，０．６，０．７，０．８，０．９ ｍｌ 置１０ ｍｌ 容量瓶中，再分别加入对照品溶液１．０ ｍｌ，用无水甲醇定容，在６２０ ｎｍ 处测定吸收度。结果见表１。
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表1 蝙蝠葛碱与溴酚绿络合后的吸收度（略）
结果表明，显色剂用量为０．２ ｍｌ 时吸收度最大，故选用显色剂用量为０．２ ｍｌ。
２．１．４ 显色稳定性的考察以加入０．１％溴甲酚绿溶液０．２ ｍｌ的样品为考察对象，在１２０ ｍｉｎ 内于６２０ ｎｍ 处测定吸收度，随行试剂空白。结果见表２。
