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穿琥宁粉针剂体外抗HIV论文

2015-01-13 01:12 作者：曾祥凤，曾耀英, 李海仙，林长乐，赵令斋，李莉平，肇静娴
【关键词】 穿琥宁粉针剂；艾滋病病毒；细胞融合；钙黄绿素
　　AntiHIV1 effect in vitro of Chuanhuning injection
　　【Abstract】 AIM: To investigate the inhibitory effect of Chuanhuning (CHN) injection on human immunodeficiency virus type 1 (HIV1) infection in vitro. METHODS: CalceinAM stained H9/HIV1ⅢB cells were treated with serially diluted CHN injection, then cocultured with target cells MT2, and HIV1mediated cell fusion was observed under a fluorescent microscope. The protective effect of CHN on HIV1infected cells was determined by MTT. Viral replication was evaluated by measuring the level of p24 antigen in culture supernatants by ELISA. RESULTS: CHN injection could suppress the fusion of MT2 and H9/HIV1ⅢB cells （EC50: 5.49 mg/L，SI: 327.6）, thus protecting HIV1 infected cells from death （EC50: 64.57 mg/L，SI: 27.85）， and decreasing p24 antigen release (EC50: 194.67 mg/L，SI: 9.23）. CONCLUSION: CHN injection can inhibit HIV1 infection in vitro.
　　【Keywords】 ChuanHuNing; HIV1; cell fusion; Calcien AM
　　【摘要】 目的: 探讨穿琥宁粉针剂在体外是否具有抗HIV作用. 方法：采用荧光染料Calcien AM标记HIV感染的慢性H9细胞（H9/HIV1ⅢB）与不同稀释浓度的穿琥宁药物作用后，与靶细胞MT2细胞混合培养，观察MT2和H9/HIV1ⅢB融合细胞的变化；MTT法检测穿琥宁对HIV感染细胞的保护作用；HIV1P24抗原试剂盒检测药物作用后的细胞培养上清P24抗原含量的变化. 结果：穿琥宁粉针剂能够抑制MT2和H9/HIV1ⅢB细胞融合（其抑制融合的EC50为5.49 mg/L，选择指数SI为327.6）；能够保护HIV感染细胞的死亡（EC50为64.57 mg/L，SI为27.85）和减少HIV1 P24抗原的表达（EC50为194.67 mg/L，SI为9.23）. 结论：穿琥宁粉针剂在体外具有抗HIV1的作用.
　　【关键词】 穿琥宁粉针剂；艾滋病病毒；细胞融合；钙黄绿素 （科教论文网 lw.nSeAc.com编辑发布）
　　0引言
　　随着我国人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV) 感染流行形势的日益严重，临床就诊的HIV感染者/AIDS（acquired immunodeficiency syndrome）患者在逐步增多，临床治疗的压力越来越大［1］. 但由于我国治疗艾滋病的药物开发及研制工作滞后，故目前尚无疗效可靠，经济实用的药物. 虽然世界上有公认的治疗艾滋病有效的高效抗逆转录酶病毒联合疗法(highly active antiretroviral therapy，HAART)，由于价格昂贵且副作用极大［2-3］，难为我国患者广泛接受并长期应用. 因此，研究和开发有效的传统中药防治艾滋病非常重要.
　　穿琥宁是从穿心莲叶中提取的一种纯中药制剂，属于一种低毒高效的抗病毒药. 具有抗炎、抗病毒及清热解毒的作用，临床已广泛用于感染性疾病的治疗,尤其对病毒性疾病有较好的疗效［4-5］. 但穿琥宁对HIV/AIDS的作用报道很少, 本研究用不同浓度的穿琥宁和H9/HIV1ⅢB作用观察其是否具有抗HIV1的作用.
　　1材料和方法
　　1.1材料中药穿琥宁粉针剂（哈尔滨二联药业有限公司）用PBS配制为100 g/L存储液，无菌分装，-20℃贮存备用. AZT（叠氮胸苷）(3′ Azido3′deoxythymidine)（美国 Biochemika Fluka） 100 mg，用二甲亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)配成100 g/L ，分装-20℃贮存备用. 药物存储液于实验前用RPMI1640培养基按需要稀释至所需工作浓度. 钙黄绿素（CalceinAM，美国 Molecular Probes），用DMSO溶解配制成1 mmol/L，分装，-20℃贮存备用. 噻唑蓝(MTT, Sigma) PBS配制5 g/L，-20℃贮存备用. P24抗原检测试剂盒（美国 ZeptoMetrix）. RPMI1640培养液(美国Gibco), 配制时加入青霉素1×105 U/L, 链霉素100 mg/L, 过滤除菌，使用时加入100 mL/L (V/V)胎牛血清（FBS）. HIV1ⅢB感染的慢性H9细胞（H9/HIV1ⅢB）和MT2细胞来自美国，由南方医科大学免疫教研室惠赠.