Nogo论文
2015-02-14 01:06
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作者：武肖娜，李容，李静雯，鞠躬【关键词】 细胞分化
作者：武肖娜，李容，李静雯，鞠躬
【关键词】 细胞分化
Effects of NogoC on differentiation and neurite extension of PC12 cells
【Abstract】 AIM: To study the effects of NogoC on the differentiation and neurite extension of PC12 cells. METHODS: The expression of NogoC in NGFtreated PC12 cells was detected using RTPCR and immunofluorescence. And pEGFPN1NogoC, the GFPtagged NogoC vector was transfected into PC12 cells. The effects of NogoC on the differentiation and neurite extension of PC12 cells were further studied by cell counting. RESULTS: A small amount of NogoC mRNA could be detected in NGFtreated PC12 cells; NogoC was found to be expressed in NGF treated PC12 cells by immunofluorescence; the neurite extension of NGFtreated PC12 cells transfected with NogoC was significantly increased according to the results of cell counting. CONCLUSION: NogoC was expressed in NGFtreated PC12 cells, and overexpressed NogoC would facilitate the differentiation and influence the neurite extension of NGF treated PC12 cells.
【Keywords】 overexpression; NogoC; PC12 cells; cell differentiation
【摘要】 目的： 利用PC12细胞研究NogoC和神经元细胞分化及突起生长的关系. 方法： NGF诱导PC12细胞，利用RTPCR及免疫荧光技术检测细胞内NogoC的表达，并在PC12细胞中过表达NogoC，通过细胞计数检测NogoC对突起生长的影响. 结果： ① RTPCR检测到NGF诱导的PC12细胞中有少量NogoC的mRNA分子表达；② 免疫荧光染色观察到NGF诱导的PC12细胞中有少量NogoC的表达；③ 细胞计数观察到转染NogoC后的PC12细胞在NGF诱导后突起增长百分数相对于EGFP组明显增高. 结论： NGF诱导的PC12细胞中有NogoC的表达，同时过表达NogoC可促进NGF诱导下的PC12细胞的分化以及影响细胞的突起生长.
【关键词】 过表达；NogoC；PC12 细胞；细胞分化
0引言
Nogo分子是影响成年哺乳动物中枢神经再生最重要的抑制因子之一［1-2］，已证明作为Nogo分子中最小的选择性剪接体NogoC在中枢神经系统（CNS）神经元中表达［3-4］. 利用RTPCR, Northern Blot等手段证明了PC12细胞中表达NogoA, NogoB的mRNA，但RTPCR并没有检测到PC12细胞中有NogoC mRNA的表达. 用Northern Blot可以检测到NGF诱导后的PC12细胞中有少量NogoC mRNA表达［5］. 这些研究均提示NogoC与神经元的分化相关. 我们以PC12细胞为神经元模型，研究NogoC在神经元细胞的分化及突起生长中的作用.
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1材料和方法
1.1材料 大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞系购自
中国科学院上海细胞生物研究所. 绿色荧光蛋白(GFP)表达载体pEGFPN1购自Clontech公司；编码人NogoC的cDNA 克隆进pEGFPN1构建成pEGFPN1NogoC［4］. Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM)、胎牛血清、马血清、 OPTIMEM、脂质体转染试剂LipofectamineTM 2000、TRIZAL等购自Gibco/Invitrogen 公司. 胰酶、NGF、购自Sigma公司. BcaBestTM RNA PCR Kit Ver 1.1试剂盒和DNA marker购自TAKARA公司. RabbitantiRat/Human NogoC多克隆抗体购自Chemicon公司. 荧光二抗Texas Red donkey antirabbit IgG购自Molecular Probes公司. PCR引物由生工
生物工程技术服务有限公司合成，新生1 d SD大鼠仔鼠由
第四军医大学实验动物中心提供.
1.2方法
1.2.1细胞培养PC12细胞使用DMEM培养基(添加50 mL/L 的胎牛血清和100 mL/L 的热灭活马血清)，置于37℃, 50 mL/L CO2的培养箱中培养，每隔48 h传代1次. 使用100 μg/L NGF的低血清DMEM培养基（含10 mL/L 的胎牛血清）对PC12细胞进行诱导分化3 d.
