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谈牛磺酸对大鼠视网膜超微结构损伤保护作用

2015-07-22 02:29 摘要： 目的 观察牛磺酸对N甲基D天冬氨酸(NmethylDaspartate，NMDA)兴奋毒性引起的大鼠视网膜组织结构及超微结构损伤的保护作用。方法 在大鼠玻璃体腔内每眼注射5μl 4mmol/L NMDA造成视网膜兴奋毒性损伤模型，20只成年雄性SD大鼠随机分为4组：正常对照组；NMDA组；NMDA 牛磺酸干预组(腹腔注射25mg/kg牛磺酸)；磷酸盐缓冲液(PBS)对照组。玻璃体注射后第4d，测量视网膜总厚度及内层厚度并用透射电镜观察视网膜超微结构。结果 NMDA使大鼠视网膜总厚度尤其是视网膜内层厚度变薄(P＜0001)，超微结构显示内核层及节细胞层神经元发生变性改变，25mg/kg牛磺酸干预可有效保护视网膜组织结构，削弱NMDA引起的视网膜超微结构损伤。结论 牛磺酸在体内可有效保护NMDA引起的视网膜组织结构及超微结构损伤。

关键词： 牛磺酸；N甲基D天冬氨酸；兴奋毒性；视网膜；超微结构


　　兴奋性氨基酸(EAA)引起的兴奋毒性是糖尿病视网膜病变〔1〕、青光眼、视网膜变性等疾病的视网膜神经元损伤及死亡的主要机制之一。体内研究表明，视网膜的兴奋毒性主要由N甲基D天冬氨酸(NmethylDaspartate,NMDA)受体介导〔2〕。牛磺酸(Taurine)是视网膜含量最丰富的游离氨基酸，近年来发现，牛磺酸可以保护培养的小脑颗粒细胞对抗兴奋毒性损伤〔3〕。本实验通过在大鼠玻璃体内注射NMDA制备视网膜兴奋毒性损伤模型，观察牛磺酸对NMDA诱导的视网膜组织结构及超微结构损伤的保护作用。
　　1 材料与方法
　　11 实验动物及视网膜NMDA兴奋毒性损伤动物模型的建立 成年雄性SpragueDawley大鼠20只，体质量200～250g(第三军医大学野战外科研究所实验动物中心)，实验动物质量合格证号：SCXK(军)2002008。大鼠腹腔注射速眠新注射液01ml/100g(长春军需大学兽医研究所)麻醉，5%托品酰胺散瞳，1%利多卡因进行角膜表面麻醉，用微量注射器从颞上方巩膜距角膜缘外3mm处进针，见针尖到达玻璃体中后部后，缓慢注入5μl 4mmol/L的NMDA〔2〕。洁霉素滴眼预防感染。眼瞎大鼠弃去。
　　12 实验分组 20只大鼠按随机数字表法分为4组：(1)正常对照组；(2)NMDA组；(3)NMDA 牛磺酸干预组；(4)磷酸盐缓冲液(PBS)对照组；每组5只大鼠。正常对照组不进行任何处理；NMDA组为上述模型组；牛磺酸干预组于眼内注射NMDA前1h及其后每天腹腔注射牛磺酸(25mg/kg〔4〕)，共注射3d；PBS对照组于玻璃体内注射5μl 01mol/L PBS。玻璃体注射后第4d观察指标变化。NMDA、牛磺酸(美国Sigma公司)，用无菌01mol/L PBS稀释。
　　13 视网膜组织病理学观察及视网膜厚度测量 腹腔注射2ml/100g 03%戊巴比妥钠处死大鼠，迅速摘取右眼，去除前节、晶状体及玻璃体，将眼杯用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，经视乳头切片(5μm)，苏木精伊红(HE)染色，观察视网膜组织结构并照相，LEICA Q WIN图像分析软件于距视乳头中心15mm处双侧测量视网膜全层及视见网膜内层(包括内核层、内网状层、节细胞层和神经纤维层)厚度，每只眼球取6张切片，每组5只大鼠结果求平均值。
　　14 视网膜超微结构观察 按前法处死大鼠，摘取左眼，将眼杯迅速置于4℃预冷的3%戊二醛固定，常规1%钅我酸固定，系列丙酮脱水，环氧树脂浸透包埋，经光镜定位后行超薄切片，于TENCAI10 PHILIPS透射电镜下观察视网膜各层细胞的超微结构。
　　15 统计分析 采用SPSS统计软件处理，组间比较用单因素方差分析。
　　2 结果
　　21 视网膜组织病理结构改变及视网膜厚度测量(表1)
　　表1 各组视网膜总厚度及视网膜内层厚度测量结果（略）
　　HE染色及视网膜厚度测量结果显示，玻璃体内注射NMDA后第4d，与未注射眼视网膜相比，视网膜总厚度变薄(P＜0001)，尤以视网膜内层厚度变薄明显(P＜0001)，节细胞数有减少，而视网膜内、外段及外核层改变不明显。牛磺酸干预使视网膜总厚度(P=0017)及内网状层厚度(P=0001)较模型组增厚，节细胞的丢失减少。表明牛磺酸干预可有效保护NMDA兴奋毒性对视网膜组织病理结构改变。