反相高效液相色谱法测定竺黄复方片中甘草酸的(2)

　　2.2  方法学考察

　　2.2.1  线性范围精密量取上述甘草酸铵对照品溶液2，4，6，8，10 μl注入液相色谱仪，记录色谱图，测定其峰面积，并以峰面积A为纵坐标，进样量C（μg）为横坐标，进行回归，得回归方程：A= 673 028.287 8C - 67 302.707 6，甘草酸铵在0.402～2.010 μg之间，进样量与峰面积线性关系良好（r=0.999 8）。

　　2.2.2  精密度实验精密吸取对照品溶液10 μl，连续进样5次，甘草酸铵峰面积的RSD为0.97％，表明仪器精密度良好。
2.2.3  重复性实验取竺黄复方片品（批号20040301）研细，取1.5 g，5份，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-0.2 mol·L-1乙酸铵-冰乙酸（65∶35∶1）溶液45 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。按上述色谱条件测定，记录色谱图，并计算含量，结果甘草酸含量（以甘草酸铵计）平均含量为2.75 mg·g-1,RSD为1.81％。上述实验表明，该方法的精密度较好。

　　2.2.4  稳定性实验取样品供试液（批号20040301）与甘草酸铵对照品分别于0，2，4，6，8 h，分别进样10 μl注入色谱仪，记录峰面积，平均峰面积为533 271 ，RSD为1.97 %,说明样品溶液8 h内稳定。

　　2.2.5  加样回收率实验精密量取甘草酸铵对照品溶液（0.2010 mg/ml）10 ml，5份，分别置100 ml具塞锥形瓶中，水浴上挥干甲醇，取已知含量的样品（批号20040301）约0.8 g，5份，精密称定，置上述锥形瓶中，加入甲醇-0.2 mol·L-1乙酸铵-冰乙酸（65∶35∶1）溶液45 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，称定重量，用上述溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取上清液，用0.45 μm过滤膜过滤，作为供试品溶液。按上述色谱条件，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，并计算回收率。结果见表1。表1  加样回收率实验结果（略）

　　2.2.6  专属性考察精密吸取阴性样品溶液10 μl，注入色谱仪，结果表明干草酸铵位置上无干扰峰。

　　2.2.7  样品测定样品按2.1.2项下方法制备样品溶液后，再按上述重复性试验项下方法测定含量。3批样品中甘草酸铵含量分别为1.034，1.103和1.008 mg/片。

　　3  讨论

    在甘草酸的含量测定中，提取溶媒比较了甲醇提取和流动相提取，结果表明用流动相提取效果更佳。

    本实验用RP–HPLC法测定竺黄复方片中甘草酸的含量，所建方法简便、准确、重复性好，可用于竺黄复方片的质量控制。

【参考文献】 （转载自http://zw.nseac.coM科教作文网）
  　　［1］国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·藏药，第一册［S］.1995:251.

　　［2］国家药典委员会．中国药典,Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：59.

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