抗肿瘤药氯法拉滨的致突变性及溶血性研究

【摘要】  目的 了解氯法拉滨(简称CLO)对骨髓红细胞和雄性小鼠生殖细胞有无致突变和致畸作用，以及对外周血红细胞有无溶解作用。方法 采用微核试验检测CLO对骨髓RBC的致突变性，采用精子畸变试验检测CLO对小鼠生殖细胞的致畸作用，采用人红细胞检测CLO的溶血性。结果 经微核试验，CLO测试组与阳性对照组两组间差异无显著性(P>0.01)，与阴性对照组间差异有显著性(P<0.05)。精子畸变试验中，CLO测试组与阳性对照组之间差异无显著性(P>0.05)，而与阴性对照组之间差异有显著性(P<0.01)。CLO在体外各时段不致人红细胞溶解。结论 经检测，CLO同其他抗癌核苷酸类似药一样，可以引起体内增殖活性强的细胞的突变，以及生殖细胞的畸变;对人红细胞的溶解性为阴性。

【关键词】  氯法拉滨;微核试验;精子畸变试验;溶血性;致畸;致突变

多数抗白血病药物的药理作用是以抑制肿瘤细胞DNA合成以及抑制某些聚合酶的作用从而阻止肿瘤细胞增殖为特征。所以，世界卫生组织(WHO)曾宣布：从DNA入手才是治疗肿瘤的关键。氯法拉滨(简称CLO)即是如此，作为一种核苷酸还原酶抑制剂，可以使肿瘤细胞DNA合成终止达到杀伤肿瘤细胞的作用[1]，那么对正常机体的生殖细胞、骨髓红细胞及外周血红细胞的影响是怎样的呢?我们即对此进行了研究。本研究是以小白鼠和体外人红细胞为实验对象来了解CLO对它们的反应性。应用统计学方法，为评价CLO对生殖细胞畸变，对骨髓红细胞致突变作用的影响规律，以及对人红细胞的作用机制提供科学依据。

　　1 实验材料

　　1.1 药品与试剂 CLO制剂：某兄弟院校赠予。阳性对照物：环磷酰胺，山西普德药业有限公司，批号20070302。阴性对照物：生理盐水。Giemsa染液。pH6.8磷酸盐缓冲液。

　　1.2 实验仪器 医用离心机：TL80-1型，中国姜堰市天力医疗器械有限公司。 恒温水浴箱：TL-420D型，天力医疗器械有限公司。显微镜：日本OLYMPAS株式会社出品，型号CX200。

　　1.3 动物 8～12周龄昆明种小白鼠100只，雄性75只，雌性25只，由山东大学医学院新药评价中心提供，实验动物生产许可证号为：SCXK鲁20030004。

　　2 实验方法

　　2.1 微核试验[2～4]

　　2.1.1 CLO试验组 选用昆明种成年小鼠30只，雌雄各半，运达本室后称重标记，体重23～27g。饲养1周，以观察其健康状况使其适应本室环境，适当控制饮食，1周内使体重变化在4g左右。将CLO配成1mg/ml的浓度。给药：小鼠按200mg/kg灌胃给药，连续1周。骨髓涂片：第八天颈椎脱臼致死小鼠，解剖剪取胸骨;载玻片上滴加小牛血清，用止血钳挤压胸骨骨髓液点加于血清中。混匀，推片，自然干燥后滴加甲醇覆盖涂膜固定。染色：Giemsa染色，将固定好的涂片滴加Giemsa应用液，根据室温染色维持10～15min后，加2倍pH6.8磷酸盐缓冲液，继续染3～5min，用PBS冲洗，晾干。观察计数：用双盲法阅片，高倍镜下观察计数嗜多染红细胞的微核发生率，每只动物计数1000个细胞。

　　2.1.2 阳性对照 小鼠10只，雌雄各半，饲养方法、条件同上。取针剂环磷酰胺200mg，加生理盐水8ml，再作1：10稀释，使之成为2.5mg/ml的浓度。每只小鼠按40mg/(kg·d)做腹腔注射，连续2天，间隔24h，末次注射后6h处死，取骨髓细胞方法、染色方法、观察计数同CLO试验组，计数阳性对照组的微核率。

　　2.1.3 阴性对照 取小鼠10只，雌雄各半，称重后以0.4ml/(25g·d)的剂量以生理盐水灌胃连续7天，计数微核率方法同上。

　　2.2 精子畸变试验 此项试验选用健康雄性小鼠，体重23～27g。