喉疾灵口含片质量标准研究论文(3)

　　参考相关文献[6-9]，建立了喉疾灵口含片中苦参碱的含量测定方法。

　　3.1色谱条件

　　色谱柱：Agilent C18 (4.6 mm×150 mm，5 μm);流动相：0.4%(体积分数)三乙胺乙腈-0.2%(体积分数)磷酸水溶液(体积比7∶93);检测波长：202 nm;流速：0.5 mL·min -1。

　　3.2对照品溶液的制备

　　精密称取苦参碱对照品适量，置量瓶中，加水使完全溶解，制成每1 mL中含苦参碱66.8 μg的溶液，作为对照品溶液。

　　3.3供试品溶液的制备

　　取本品10片，研细，取约2 g,精密称定，精密加入稀氨水(1→10)25 mL，称定质量，超声处理30 min使溶解，放冷，再称定质量，用水补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 mL，置中性氧化铝柱(100～200目，5 g，内径1 cm)上，用氨水饱和的乙酸乙酯50 mL洗脱。收集全部洗脱液，蒸干，残渣用无水乙醇1 mL超声溶解，再用少量水超声洗涤多次，全部合并置5 mL量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

　　3.4缺山豆根阴性对照溶液的制备

　　按处方工艺制备缺山豆根阴性样品，称取2 g，按“3.3”项下方法制备，即得。

　　3.5系统适应性试验

　　分别精密吸取对照品、供试品、缺山豆根阴性对照溶液各10 μL，按“3.1”项条件进样。在该色谱条件下，苦参碱与其他成分可达基线分离，苦参碱保留时间约为6.7 min，理论塔板数不低于3 000，各成分分离度均大于1.5;阴性对照无干扰。见图6。[PSd176;S1〗A.苦参碱对照品; B.供试品; C.缺山豆根阴性对照图6苦参碱的HPLC图Figure 6HPLC chromatograms of matrine

　　3.6方法学考察

　　3.6.1线性范围的考察分别精密吸取苦参碱对照品溶液 1、2、4、8、10 μL依次进样，按“3.1”项下条件测定峰面积，以苦参碱进样量(X)对峰面积(Y)进行线性回归，得回归方程为Y=4.2205×10-3X+22.697，r=0.999 8。结果显示，苦参碱进样量在0.066 8～0.668 μg范围内与峰面积有良好的线性关系。

　　3.6.2精密度试验精密吸取供试品溶液(20070501)10 μL，连续测定6次，测定峰面积，计算含量。结果苦参碱平均质量分数为0.579 9 mg·g-1，RSD为0.13%，表明仪器精密度良好。

　　3.6.3稳定性试验精密吸取同一批号(20070501) 供试品溶液，按“3.1”项下色谱条件，分别于0、5、6.5、8、9、12 h 进样10 μL，测定峰面积，计算含量。结果苦参碱平均质量分数为0.579 0 mg·g-1，RSD为0.27%，