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研究妇洁颗粒的体外、体内抗菌活性论

2015-02-11 01:04 摘要：目的研究观察妇洁颗粒的体外、体内抗菌活性。方法采用平皿二倍稀释法测定了妇洁颗粒对临床分离的64株临床常见的革兰氏阳性及革兰氏阴性菌的体外抗菌作用。选择了金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌及乙型溶血性链球菌进行了小鼠体内细菌感染的保护实验。结果该药体外对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及大肠杆菌的作用为最强，MIC50分别为0.25，2和1 g·L-1；体内实验也显示对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及变形杆菌造成的体内感染动物有较好的保护作用。结论对临床常见的革兰氏阳性及革兰氏阴性菌均具有较强的杀灭或抑制作用。

关键词： 妇洁颗粒； 抑菌； 大肠杆菌； 金黄色葡萄球菌

阴道炎、宫颈炎是妇科多发病、常见病，大多数是由细菌等病原微生物引起，长期炎症，可发展为宫颈糜烂。妇洁颗粒为治疗阴道炎、宫颈炎的中成药，具有清热解毒、活血消炎的功效。为了解抗菌谱及药效，我们对妇洁颗粒进行了抗菌实验研究。
1 材料
1.1 受试物 妇洁颗粒，深棕色膏剂，每克膏相当于生药3.029 g，由本所提供，批号020820；阳性对照药：妇乐冲剂：规格6 g/袋，山东泰安红旗制药厂生产，批号020309。
1.2 菌种、动物与试剂 实验菌株，本实验共选用7种细菌。包括金黄色葡萄球菌12株、表皮葡萄球菌10株、大肠杆菌14株、肠球菌10株、普通变形杆菌12株、乙型溶血性链球菌6株，共计64株。以上菌株均为山东大学齐鲁医院收集的临床分离菌株。全部菌种均进行常规方法鉴定；金黄色葡萄球菌ATCC25922、大肠埃希氏菌ATCC25923，均来源于中国药品生物制品检定所。以上述菌株作为试验中的质控菌株，各菌分别稀释至终浓度为105 cfu/ml备用。健康昆明种小鼠，体重18～22 g，由山东鲁抗医药集团提供，合格证号：鲁动质字D20020921。营养肉汤，卫生部上海生物制品研究所生产，批号000101；MH琼脂，上海市医学化验所试剂厂生产，批号990601。 （转载自科教范文网http://fw.nseac.com）
1.3 供试品的配制采用二倍稀释法将妇洁颗粒及妇乐冲剂分别稀释配制成终浓度分别为128，64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25 g/L的含药琼脂平皿培养基，乙型溶血性链球菌用含有10%脱纤维的兔血含药血液琼脂平皿培养基，冷藏备用。以上操作均在无菌条件下进行。
2 方法
2.1 实验菌株与标准菌株的最小抑菌浓度（MIC）测定［1］ 将稀释好的菌液用多点接种仪分别接种到上述各含不同浓度药物的琼脂平皿培养基的表面上，37℃培养18 h，无细菌生长的平皿中所含药物的最低浓度即为该药物的最小抑菌浓度(MIC)。

2.2 对感染小鼠的体内保护实验［2］ 实验菌液的制备：将金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变形杆菌、乙型链球菌分别定量接种于适宜的MH肉汤或含10%羊血的MH肉汤中，放孵箱37℃增菌6 h，取此菌液0.1 ml转种于10 ml MH肉汤或含10%羊血MH肉汤中，放孵箱37℃孵育18 h，该菌为原菌液，适当稀释后，用5%灭菌胃膜素配制成感染动物所需浓度菌液，供实验用。
最小致死量（MLD）实验：将原菌液用5%胃膜素进行递次稀释。选健康小鼠若干，雌雄各半，分别腹腔注射不同浓度的各菌液，进行各菌株的最小致100%动物死亡（MLD）测试，测得金黄色葡萄球菌MLD为5×108 cfu/ml，大肠杆菌MLD为5×109 cfu/ml，变形杆菌MLD为5×108 cfu/ml，乙型链球菌MLD为1×106 cfu/ml。
对感染小鼠的体内保护实验：选健康昆明种小鼠18～22 g，雌雄各半，随机分为5组，每组10只，同时设MLD和1/10 MLD各1组，分别给每只小鼠腹腔注射菌液0.5 ml MLD菌量，于感染后即刻，6，12，24，48，72 h给各组小鼠不同浓度的药物，观察并记录感染后小鼠死亡数，连续观察14 d，根据小鼠死亡数，按Bliss法计算半数有效剂量ED50值及95%的可信限。
3 结果
3.1 妇洁颗粒对64株细菌的MIC测定 妇洁颗粒对大多数试验菌种的MIC范围均在0.25～32 g/L之间，MIC50多为0.25～8 g/L，对金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及大肠杆菌的作用为最强，MIC50分别为0.25，2和1 g/L，对变形杆菌和肠球菌作用次之，MIC50均为4g/L，对乙型溶血性链球菌的作用较弱，MIC50为32 g/L。同时，妇洁颗粒对2株标准菌株也有较好的抑制作用，对ATCC25922，ATCC2592的MIC分别为2，1 g/L。综合上述结果，妇洁颗粒对试验中大部分革兰氏阳性及革兰氏阴性菌均具有较强的杀灭或抑制作用，抗菌谱较为广泛。结果见表1。表1 妇洁颗粒对64株细菌的MIC测定