探析不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定
2015-03-04 01:11
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摘要：目的建立不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定方法
摘要：目的建立不同品种葛根中葛根素及总黄酮的含量测定方法。方法采用RP-HPLC法，以甲醇-水（32∶68）为流动相，检测波长为250 nm测葛根素含量；紫外分光光度法测柴葛、粉葛中总黄酮含量。结果葛根素峰分离度提高，峰形改善；葛根素0.204～2.04 μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9），回收率为98.7%(n=5)，精密度RSD=0.86%。总黄酮浓度在4.08～16.32 μg/ml范围内与吸收度线性关系良好（r=0.999 8)。结论该法灵敏、准确、简便易行,重复性好,可用于中药葛根药材及饮片的质量控制。
关键词： 柴葛 粉葛 葛根素 总黄酮 高效液相色谱
葛根为豆科植物柴葛Pueraria lobata (Willd. )Ohwi 和甘葛藤Pueraria thomsonii Bent h. 的干燥根，前者习称柴葛，甘葛藤习称“粉葛”［1］，始载于《神农本草经》，味甘、辛，性平，具有增加脑及冠状动脉血流量、降低血管阻力、收缩平滑肌、降血糖及解热等多种功效［2］。民间用于治疗伤寒、温热头痛、烦热消渴等症，也是中医常用的祛风解毒药。现代研究表明，葛根含葛根异黄酮，主要为葛根素(perarin) 、大豆苷(daidzin) 、大豆苷元(daidzein) 3种活性成分，其中葛根素是本属的特征成分，也是主要成分，为了对葛根进行有效的质量控制，本实验以葛根素为指标，以柴葛、粉葛药材为对象，建立了高效液相色谱法测定其葛根素的含量方法，并采用紫外分光光度法对其中的总黄酮进行了含量测定，为柴葛、粉葛的药材鉴定提供参考方法。
1 仪器与材料
1.1 仪器美国 Waters 公司600-2487高效液相色谱仪,Millenium数据处理系统;Waters2487紫外检测器；岛津UV-2401PC型紫外分光光度计；岛津AY120型万分之一电子分析天平；SB3200型超声清洗器。
1.2 材料葛根素对照品：中国
药品生物制品检定所；甲醇为色谱纯；水为重蒸馏超纯水；其它试剂均为分析纯。柴葛产于安徽岳西，粉葛产于广西。
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2 方法与结果
2.1 HPLC法测定葛根中葛根素的含量
2.1.1 色谱条件色谱柱：Zorbax XDB-C18（4. 6 mm ×250 mm , 5 μm)；流动相∶甲醇-水（32∶68）；流速1 ml/min；检测波长250 nm；柱温22℃；进样体积10μl。理论板数按葛根素峰计算不低于5000。在该色谱条件下，样品中的葛根素与其它峰均能达到基线分离，保留时间在14.3 min左右，对照品与样品的色谱图见图1。
图1 对照品Ⅰ、柴葛索氏提取Ⅱ、粉葛索氏提取Ⅲ的HPLC色谱图（略）
2.1.2 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品5.1mg，甲醇定容于25 ml量瓶。分别移取0.5，1.0，2.0，2.5 ml于5 ml量瓶，水定容，与原液共同作为HPLC用对照品溶液。
2.1.3 供试品溶液的制备
热回流提取法：精密称取柴葛、粉葛粉末（过50目筛）各0.1 g，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50 ml，称重。回流提取30 min，放冷，称重并以30%乙醇补足减失重量，摇匀过滤，取续滤液为供试品，待测。
索氏提取法：称取柴葛、粉葛粉末各0.5 g, 精密称定，以甲醇为提取剂提取4h，过滤，浓缩提取液并用甲醇定容于10 ml量瓶。超声处理30min，取上清液以水定容于10 ml量瓶，待测。
2.1.4 线性关系考察取对照品溶液，按照“2.1.1”色谱条件进样10 μl，葛根素进样量X(μg)为横坐标，以峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为：Y= 3.507 6×106X 3.274 5×104，r = 0.999 9。结果表明，葛根素进样量在0.204～2.04μg范围内与峰面积线性关系良好，可用外标两点法计算含量。
2.1.5 精密度考察在“2.1.1”项色谱条件下，吸取同一对照品溶液10 μl，连续进样5次，测得峰面积，RSD=0.8%，表明进样与峰面积积分的精密度良好。
2.1.6 重复性考察取同一批柴葛、粉葛样品5份，按“2.1.3”项下的方法制样后，以“2.1.1”项色谱条件进样10 μl，测定葛根素的峰面积，按外标法计算含量，RSD=2.8%，表明分析方法重复性良好。
