黄芪与红芪的高效液相色谱鉴定论文

【摘要】 　　目的探讨高效液相色谱法（HPLC）鉴别中药饮品黄芪与红芪中黄芪甲苷的含量，旨在鉴别药材中用红芪代替黄芪的伪品。方法HPLC法鉴别中药饮品黄芪与红芪中黄芪甲苷的含量，根据测定结果鉴别黄芪与红芪。结果样品的测定结果显示，黄芪药材中含有一定量的黄芪甲苷，而红芪中未见黄芪甲苷的成分。结论HPLC法可有效鉴别中药饮品黄芪与红芪，是制剂质量控制的一种有力手段。

【关键词】 黄芪；红芪；高效液相色谱

黄芪，始载于《神农本草经》，被列为上品。李时珍谓：“耆长也。黄耆色黄，为补药之长故名”。苏颂谓：“今河东、陕西州多有之。根二、三尺以来，独茎或作丛生， 枝干去地二、三寸，其叶扶作羊齿状，又如蒺藜苗。七月中黄紫花。其实作荚子，长寸许。八月采根用。其皮折之如绵，谓之绵黄芪”。据考证古代正品黄芪以膜荚黄芪及蒙古黄芪为主。

黄芪性温，味甘，为常用补气药，具有补气固表、利尿排毒、排脓、敛疮生肌等功效［1］。多年研究表明，黄芪皂苷是黄芪药效物质基础的重要组成之一，在抗衰老、调节免疫功能、保护心肌和大脑缺血等方面具有显著作用。黄芪甲苷是主要有效成分之一，具有抗炎镇痛、降压等重要生理活性［2］。红芪，豆科植物多序岩黄芪的根，通称“晋芪”，主产于甘肃南部地区。表面灰红棕色，栓皮易剥落露出浅黄色的皮部及纤维，质坚硬而致密，难折断，折断面纤维性强，且富粉性，气微而特异，味微甜。显微镜下可见晶鞘纤维，草酸钙棱晶，无石细胞。抗菌、降压作用较黄芪强。本研究采用高效液相色谱法（HPLC）测定中药饮品黄芪与红芪中黄芪甲苷的含量，旨在鉴别药材中用红芪代替黄芪的伪品。 （转载自http://zw.NSEAC.com科教作文网）

1 仪器与试药

Agilen t 1100 高效液相色谱仪，包括：四元泵，在线脱气机，柱温箱；蒸发光散射检测器（美国惠泽）；Sartorius BS 400S-WEI万分之一天平（北京塞多利斯天平有限公司）。乙腈（美国Fisher公司，色谱纯），甲醇、正丁醇、氨试液（AR，均为广州化学试剂厂），水为超纯水。黄芪甲苷（中国药品生物制品检定所，批号：07812200311，供定量测定用）。黄芪与红芪均采用中药饮品。

2 方法与结果

2.1 黄芪及红芪的一般鉴别

2.1.1 黄芪性状鉴别：根呈圆柱形，少有分枝，上粗下细，长约8～10cm ，直径1～3.5cm。表皮灰黄色或淡棕褐色，有纵皱纹及横向皮孔。质地硬，略韧，断面纤维性，并显粉性。横断面的皮部黄白色，木部淡黄色，有菊花心，显放射状纹理及裂隙。气微，味微甜，有豆腥味。显微鉴别：①根横切面　木栓层细胞数列，栓内层为厚角细胞，切向延长。韧皮部有纤维束，与筛管群交替排列；近栓内层处有时可见石细胞及管状木栓组织；韧皮射线外侧弯曲有裂隙。形成层成环；木质部导管单个或者2～3个成群，有木纤维束，木射线明显，薄壁细胞含淀粉粒。②粉末为淡黄色，韧皮纤维细长，木纤维长而壁厚，导管为网纹或具缘纹孔，木栓细胞为多角形，棕色，石细胞较少，长方形、类圆形或不规则状，壁甚厚，淀粉粒多为单粒，类圆形，偶有2～3粒组成复粒。理化鉴别：①本品粉末3 g，加水30 ml，浸渍过夜，滤过，取滤液1ml，加0.2%茚三酮溶液2滴，在沸水中加热5 min，冷后呈紫红色 (检查氨基酸、多肽) 。②取以上溶液1ml，于60℃水浴中加热10 min，加入5 % α- 萘酚乙醇溶液5滴，摇匀，沿管壁缓缓加入浓硫酸0.5 ml，在试液与硫酸交界处出现紫红色环(检查糖、多糖)。职称论文 （转载自http://zw.nseac.coM科教作文网）

2.1.2 红芪红芪为豆科植物多序岩黄芪的干燥根，表面红棕色或灰棕色，上端略粗，皮部黄白色，约占断面的1/3，木质部黄棕色或淡黄棕色，形成层环浅棕色，质坚硬而较致密，不易折断，折断面纤维状，显菊花心，富粉性，嚼之有豆腥气，栓皮易脱落而露出淡黄色的皮部及纤维。

2.2 HPLC鉴别

2.2.1 色谱条件色谱柱为Hypersil ODS（200 mm×416 mm，5 μm）SN：1514654； 流动相为乙腈-水（32∶68）；体积流量110 ml/min；柱温：25℃；ELSD参数：蒸发温度：45℃，N2压力：179260 Pa；衰减参数：理论塔板数以黄芪甲苷计算不低于4 000。见图1。

2.2.2 标准曲线与线性关系精密称取黄芪甲苷对照品5.00 mg 置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.5 mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液，精密吸取对照品溶液4，8，12，16，20 μl进样，测定，以对照品溶液质量浓度的自然对数为横坐标（X），峰面积的自然对数为纵坐标（Y）绘制标准曲线，计算回归方程为Y=1.294×10-6X+0.027 48，r=0.999 6，黄芪甲苷在2.024～10.120μg 的线性关系良好。

2.2.3 供试品溶液的制备精密称取黄芪粉末（过40目筛）4.0 g，置60 ml索氏提取器中，加40ml甲醇冷浸过夜，再加30 ml甲醇，80℃水浴回流4h［3］，提取液回收并浓缩至干，残渣加10 ml水，微热使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取4次（4×40 ml），合并正丁醇液，用40 ml氨试液充分洗涤2次，每次40 ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加5 ml水使溶液，通过D101型大孔吸附树脂柱（内径1.5 cm，长12 cm），以水50ml洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并定容至5 ml量瓶中，摇匀，即得。