正交试验法优选和丹舒胶囊提取工艺论(2)

　　对正交试验结果进行极差和方差分析，结果见表2、表3。表2 水煎煮组正交试验结果注：综合评分=(出膏率/最大出膏率)×100×0.4+(黄芪甲苷含量/黄芪甲苷最高含量)00×0.6表3 水提工艺方差分析表注：F0.05(2，2)=19.000

　　由表2可知，3个因素的极差大小顺序为A>C>B，提取次数对提取工艺的影响最大，其次为加水量，提取时间影响最小。由表3可知，因素A对本复方的提取有显著性影响，因素B、C无显著性影响。故最佳工艺为A3B1C1，即用8倍量水，提取3次，每次1.5 h。按优选的最佳工艺提取3批样品进行验证实验，可知，3批样品出膏率分别为22.14%、21.09%、22.47%，黄芪甲苷含量分别为1.91、1.85、1.89 mg·g-1，验证结果表明工艺基本稳定可行。

　　2.5 醇提组正交试验设计

　　根据文献和预实验结果[4]，采用正交试验设计，对乙醇浓度(A)、醇用量(B)、提取时间(C)3个试验因素，每个因素3个水平进行优选，并以浸膏得率和丹参酮ⅡA含量作为考察指标进行试验。因素水平表见表4。

　　2.6 丹参酮ⅡA含量测定

　　2.6.1 色谱条件 色谱柱为Hypersil ODS2(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为甲醇菜(体积比82∶18);检测波长为270 nm，流速为1.0 mL·min-1，柱温为30 ℃。理论塔板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于3 000。

　　2.6.2 对照品贮备液的制备 精确称取丹参酮ⅡA 5.12 mg，置5 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，丹参酮ⅡA的质量浓度为1.024 mg·mL-1。表4 醇提组的因素水平表

　　2.6.3 线性关系考察 精密吸取对照品储备液0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.0 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取各对照品液10 μL进样，按“2.6.1”项下色谱条件测定峰面积，以对照品的进样量(μg)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)进行回归分析，得丹参酮ⅡA回归方程为Y=473217 X+9122(r=0.999 9)，线性范围为0.102 4～1.024 μg。

　　2.6.4 样品溶液的测定 用L9(34 )正交表安排试验，称取处方量的药材，按设定方案进行回流，收集回流提取液，定容至200 mL，精密量取50 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷却0.5 h，迅速称量。精密称定，精密加入流动相50 mL，称定重量，避光超声处理30 min，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过。精密量取续滤液1 mL，用甲醇定容于100 mL容量瓶中，即得。分别精密吸取对照品、供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，按“2.6.1”项下色谱条件测定。

　　2.7 醇提组最佳工艺确定 正交试验结果见表5，方差分析结果见表6。

　　由表5可见，3个因素的极差大小顺序为C>A>B，提取时间对提取工艺的影响最大，醇浓度次之，醇用量影响最小。由表6可见，提取时间对提取效果有显著性影响，醇浓度、醇用量无显著性影响。考虑生产成本，确定A1B1C3为最佳工艺，即用6倍量60%乙醇溶液，提取2次，提取时间分别为2.0、1.5 h。按优选的最佳工艺提取3批样品进行验证实验可知，3批样品出膏率分别为20.24%、20.32%、19.97%，丹参酮 Ⅱ A含量分别为0.941、0.937、0.931 mg·g-1，验证结果表明工艺基本稳定可行。表5 醇提组正交试验结果注：综合评分=(浸膏得率/最大浸膏得率)×100×0.4+(丹参酮ⅡA含量/丹参酮ⅡA最高含量)×100×0.6　表6 醇提工艺方差分析表

　　3 讨论