正交试验法优选和丹舒胶囊提取工艺论

【摘要】 目的 优选复方和丹舒胶囊中药材的最佳提取工艺。方法 采用正交设计法，以水、醇2组提取物中浸膏得率、有效成分(分别为丹参酮ⅡA和黄芪甲苷)提取率为指标，确定提取参数。结果 确定黄芪等水溶组药材采用水提，工艺为8倍量水，煎煮3次，每次1.5 h;经水提丹参药渣等采用醇提，工艺为6倍量60%乙醇，提取2次，分别提取2.0、1.5 h。结论 优选的和丹舒胶囊提取工艺稳定、可行，提取率高。

【关键词】 和丹舒胶囊;丹参酮ⅡA;正交设计;黄芪甲苷;提取工艺

Optimization of the extraction process of Hedanshu capsules by orthogonal design

　　ZHANG Shu瞝ing1，SHA Mei1，LU Jun2，XIA Chao2

　　(1.Department of Pharmacy,Fujian College of Traditional Chinese Medicine, Fuzhou,Fujian 350108,China; 2.Jiangsu Province Institute of Material Medica, Nanjing,Jiangsu 210009,China)Abstract:Objective To investigate the optimal extraction for compound Hedanshu capsules. Methods Orthogonal test was designed with the yields of extracts, tanshinone ⅡA, astragaloside IV as index.Results The optimal condition for extracting Radix Astragali group was 8 folds amount of water,3 times,1.5 hours each time and the optimal condition for extracting Radix Salviae Miltiorrhizae group was 6 folds amount of 60% alcohol,2 times, 2.0 hours and 1.5 hours each time.Conclusion The optimized extractive technology is reproduciable and efficient with high yields.

　　Key words:Hedanshu capsules; tanshinone ⅡA; astragaloside IV; orthogonal design; extractive technology

　和丹舒胶囊由丹参、黄芪、益母草、马鞭草、牛膝、黄柏等多味中药组成，为福建中医学院名老中医林源东的临床验方，具有清热解毒、活血化瘀、益气补肾之功效，适用于细菌性或非细菌性引起的慢性前列腺炎等症，疗效显著[1]。由于原为汤剂，为方便临床用药和患者携带，实验对组方成分进行分析，根据各味药材所含成分的理化性质，拟分水溶和醇溶两组提取。其中黄芪、丹参等药材采用水煎煮提取;经水提丹参药渣、牛膝等采用醇提，对其提取条件采用正交实验法进行研究，以确定最佳提取工艺，使制剂工艺更加合理。

　　1 仪器与试药

　　美国Waters 600E高效液相色谱仪，包括二极管阵列检测器，四元泵，在线真空脱气机，Millennium32色谱工作站;Sartoious BT 25S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司);恒温干燥箱(北京市朝阳区来广营医疗器械厂);DK睸24型电热恒温水浴锅(上海精宏试验设备有限公司)。丹参、黄芪等实验药材均购自福建同春药业有限公司，经福建中医学院药学系刘小芬讲师鉴定符合2005版中国药典(一部)有关规定;丹参酮ⅡA对照品(批号110766200416)、黄芪甲苷对照品(批号110781200512)由中国药品生物制品检定所提供;甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 水煎煮组正交试验设计 采用正交试验法对黄芪、丹参等药水提工艺进行优选。根据文献报道[2]，以提取次数(A)、提取时间(B)、加水量(C)为试验因素，每个因素3个水平进行优选，以浸膏得率和黄芪甲苷含量作为考察指标进行试验。因素水平见表1。表1 水煎煮组的因素水平表论文代写

　　2.2 浸膏得率测定 精密吸取母液20 mL，置干燥恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥3 h，迅速取出，放入干燥器中，冷却30 min，迅速精密称定，计算出膏率。

　　2.3 水煎液中黄芪甲苷含量测定[3]

　　2.3.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：DiamonsilTM 色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相：乙腈菜(体积比36∶64);流速：1.0 mL·min-1;漂移管温度：105 ℃;载气流速：2.7 L·min-1。理论塔板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4 000，分离度大于1.5。

　　2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品10.16 mg，置10 mL容量瓶中，加入甲醇定容，制成1.016 mg·mL-1的溶液，即得。

　　2.3.3 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液0.3、0.5、1.0、2.0、3.0 mL，分别置5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按“2.3.1”色谱条件，分别注入液相色谱仪，进样量为20 μL，以对照品质量的自然对数为横坐标，以峰面积的自然对数为纵坐标，绘制标准曲线。结果得线性对数方程为Y=2.3157 X+65.2485(r=0.999 8)，表明黄芪甲苷在1.21～12.19 μg范围内线性关系良好。

　　2.3.4 供试品溶液的制备及测定 按表2条件进行提取，合并提取液，滤过，滤液浓缩至1.1 g·mL-1，加乙醇使乙醇质量分数达75%，静置24 h，取上清液减压回收乙醇，浓缩定容于100 mL量瓶中，摇匀。分别精密量取20.0 mL，用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次25 mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次20 mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶液并转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得。

　　2.3.5 含量测定 分别精密吸取对照品、供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪，按“2.3.1”项下色谱条件测定，计算。

　　2.4 水煎煮组最佳工艺确定