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1 引 言 卵巢癌是妇科死亡率最高的恶性肿瘤，化(3)

2013-07-26 01:25

　　4。5。2 p38MAPK 和caspase-3
基因的表达变化p38MAPK 特异性抑制剂SB203580 处理后，与空白组和对照组比较，实验组p38MAPK基因的表达逐渐减少(P 均<0。05) (FIG。5 A, C)，凋亡因子caspase-3 基因表达逐渐增多(P 均<0。05) (FIG。5 B, D)，而对照组三组间及其和空白组间无统计学差异(P 均>0。05) 。

　　4。5。3 p38MAPK、p-p38MAPK 和caspase-3
蛋白的表达变化p38MAPK特异性抑制剂SB203580 处理后，p38MAPK相对表达强度虽然没有显着差异，但其磷酸化形式p-p38MAPK 相对表达强度明显下降(P 均<0。05)，并随着SB203580 浓度增加逐渐减少(P 均<0。05)，而凋亡因子caspase-3 蛋白表达明显增高(P 均<0。05)，并随着SB203580 浓度增加逐渐增高(P 均<0。05) (FIG。5 E, F) 。对照组三组间及其和空白组间无差异性(P 均>0。05)。

　　4。6 卡铂和SB203580 作用后
p38MAPK 基因表达的变化分别取指数生长期卵巢癌细胞系RMG-I 和RMG-I-H 细胞，实验分六个组：单加卡铂组(其终浓度为60 μg/ml)；加SB203580+卡铂组(加入SB203580 使其终浓度为10 mM，预孵育45 min，加入卡铂使其终浓度为60 μg/ml)；两细胞系分别另设阴性对照组，继续培养72 h，收集细胞。利用RT-PCR 法检测RMG-I 细胞与RMG-I-H 细胞的p38MAPK 基因的表达(FIG。6)，结果表明，两细胞系在卡铂作用下p38MAPK 相对表达强度明显高于相对的阴性对照组(P 均<0。05)；且转染后RMG-I-H 细胞p38MAPK 相对表达强度明显高于未转染的RMG-I细胞(P<0。05)；两细胞系SB203580+卡铂组p38MAPK 相对表达强度均明显低于相对的单用卡铂组(P 均<0。05)。两细胞系在卡铂作用下caspase-3 相对表达强度明显高于相对的阴性对照组(P 均<0。05)；且转染后RMG-I-H 细胞p38MAPK 相对表达强度明显低于未转染的RMG-I细胞(P<0。05)；两细胞系SB203580+卡铂组caspase-3 相对表达强度均明显高于相对的单用卡铂组(P 均<0。05)。

　　5 讨论

恶性肿瘤耐药性的产生是极其复杂的多因素的过程，其发生机理尚不清楚，目前认为可能与进入细胞内的药物的外排增加、细胞内解毒物质的增多、药物靶位点的变异或药物损伤后的靶位点修复的增强、以及细胞凋亡的减弱等多种机制有关。我们在前期研究中发现细胞表面Lewis y 增加卵巢癌RMG-I 对卡铂、5-Fu 及紫杉醇的耐药[3 ,5]，但是Lewis y 引起耐药的具体机理目前尚不清楚。

　　Lewis y 抗原是双岩藻糖基化的寡糖，属于A, B, O, Lewis 血型家族成员。 75%的上皮性卵巢癌出现Lewis y 不同程度的过量表达，且表达增加的患者预后不佳，我们利用基因转染的方法将人α1,2-FT 基因转入人卵巢癌细胞系RMG-I 建立Lewis y 抗原稳定高表达细胞系RMG-I-H[3]，利用细胞免疫化学染色法检测RMG-I-H 和RMG-I 细胞膜上Lewis y 抗原的表达，结果显示RMG-I-H 的Lewis y 表达明显高于RMG-I[4]，并利用该细胞系进一步证明了Lewis y 抗原的表达与卵巢癌的恶性生物学行为有关[4,6]。本实验通过RT-PCR 方法证明RMG-I细胞转染α1, 2-FT基因后FUT-1mRNA及Lewis y抗原水平显着增加的同时，caspase-3凋亡因子mRNA 和蛋白水平显着减少，另外，在前期的研究中我们用流式细胞仪也检测出转染后细胞RMG-I-H 的凋亡率减少，提示转染后Lewis y 抗原高表达的同时细胞凋亡减弱。

　　我们利用基因芯片的方法研究发现，α1, 2-FT 基因转染后的人卵巢癌细胞系RMG-I-H与转染前的细胞系RMG-I 相比，有88 种差异性表达基因，其中60 种基因表达增强，差异表达的基因参与了细胞增殖，信号转导，细胞黏附等多方面[8]。我们还发现，α1, 2-FT 基因转染后的RMG-I-H 细胞的部分耐药蛋白在基因及蛋白水平表达明显增高(如MDR-1、MRP-1、MRP-2、PKC-α、TopoⅠ)，其变化与Lewis y 抗原表达密切相关[9]，其中PKC-α 作为细胞传导通路中经典的蛋白激酶，可激活抗凋亡的信号传导通路进而参与多种肿瘤细胞的耐药。另外，H sieh 等[10]研究结果发现蛋白激酶C-α(protein kinase Calpha, PKC-α)低表达的细胞株细胞增殖能力、侵袭性均降低,且p38MAPK 磷酸化水平降低，经p38MAPK 抑制剂SB203580作用后的细胞株的增殖侵袭及转移能力也降低，提示p38MAPK 参与PKC-α 介导的肝癌细胞增殖和侵袭。因此我们推测，Lewis y抗原可能作为细胞表面信号传导系统的重要组成成分，参与细胞的耐药。