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1.2.2 PCR扩增 用已定量的DNA样本进行PCR扩增。所有试剂均采用nm23(RT-PCR用β-actin作为内对照)及p53突变检测试剂盒。PCR反应总体积为25 μl。PCR扩增程序:p53:95 ℃预变性5 min,95 ℃变性30 s,60 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,循环40次,用SSCP检测常规灌制8%聚丙烯酰胺凝胶,取p53扩增产物加入变性上样缓冲液,95 ℃变性10 min,点样,120 V电泳3 h,硝酸银染色,nm23:PCR扩增程序同前,扩增产物用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测。分析结果。
1.2.3 统计学方法 应用SPSS 11.0软件统计,以P<0.05为差异有显著性。
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