榄香烯联合生物大分子合成抑制剂对Hca-F肝癌的作(2)

2014-11-27 01:15

导读：1 材料与方法 1．1 动物 Balb/c系小鼠，引自中国医学科学院北京药物研究所，由本室自行繁殖提供。 1．2 瘤株小鼠腹水型肝癌H22的高淋巴道转移亚系Hca-F［

1 材料与方法

1．1 动物 Balb/c系小鼠，引自中国医学科学院北京药物研究所，由本室自行繁殖提供。

1．2 瘤株小鼠腹水型肝癌H22的高淋巴道转移亚系Hca-F［2］，由本校病理学教研室凌茂英教授赠送，本室常规传代、保种。

1.3 主要药品和试剂 1%榄香烯注射液(elemene，大连市医药科学研究所 )。吡柔比星(Pirarubicin，THP，深圳万乐药业有限公司生产)。RPMI1640培养基（GIBCO，USA）。

1.4 Hca-F细胞悬液的制备将传代保种的Hca-F腹水型肝癌细胞常规接种于小鼠腹腔，0.2ml/只，收集第7～8天的腹水（肿瘤细胞生长最旺盛时期，死亡细胞和红细胞含量较少），HS液破除红细胞，PBS 洗3次，计活细胞数，用含20%小牛血清RPMI1640培养液调细胞数至所需浓度。

1.5 Hca-F肝癌细胞的处理将Hca-F肝癌细胞用榄香烯（50μg/ml）、吡柔比星（10μmol/ml）按本室常规方法单独或复合处理，设单独瘤细胞（不处理）对照。Hca-F细胞浓度均为1×106/ml，每个观察时间点均设3支复管，加入相应的药品，以台盼蓝拒染法于不同时间计数活细胞数，计算存活率。

1.6 单纯榄香烯处理和榄香烯联合THP处理对Hca-F增殖的影响用MTT法测其OD值。

1.7 榄香烯联合THP处理对瘤细胞超微结构的影响［3］ Hca-F细胞用榄香烯、THP单一或复合处理，细胞浓度和处理方法同前，处理时间为1h，收细胞，用PBS洗3次，以2.5%戊二醛固定，常规包埋制片，铀—铅双染色，透射电镜下观察摄片。

1.8 细胞凋亡的检测和细胞周期的测定细胞收集同前，用PBS洗3次，加入 PI染色液染色30min（避光、室温）。上机检测，Cellquest软件低速获取。用Modfit2.0软件分析。

2 实验结果

2.1 榄香烯联合THP处理对Hca-F存活的影响单纯用榄香烯处理，Hca-F的存活率就明显降低，在30min～1h的时间内，细胞死亡率随着药物浓度增加而增加（表1），单用THP处理，也可导致Hca-F细胞死亡、蓝染，其细胞死亡率也随着药物浓度增加而增加，榄香烯联合THP处理，肿瘤细胞死亡率可达100%。

（科教作文网 zw.nseac.com整理）

表1 榄香烯单独或联合THP处理对Hca-F细胞存活的影

2.2 榄香烯和THP联合处理对Hca-F细胞周期与凋亡的影响实验结果表明榄香烯与THP联合处理对Hca-F细胞周期变化的影响及凋亡细胞百分率变化与单用THP相比也无明显区别，榄香烯处理与不处理Hca-F对照组细胞各时相百分率及凋亡细胞百分率变化无明显区别（见表2和图1）。