冠心病痰瘀证与载脂蛋白E基因多态性关系的研究(2)

　　1.6  统计学方法  所有资料均采用SAS软件包进行分析。等位基因频率计算采用频率记数法；基因型，基因分布频率及基因和证候的相关性分析用χ2检验。不同基因型之间血脂的均数比较采用单因素方差分析。

　　2  结果

　　2.1  ApoE基因目的片段PCR扩增结果  所有300例血样均获得了阳性扩增条带，目的片段分子量为292 bp。见图1。

　　2.2  PCR产物HhaI酶切分型结果  在300例样品中共检测出6种ApoE基因型，分别为E 3/3、E 4/4、E 2/3、E 2/4、E 2/2、E 3/4型，等位基因分别为ε2、ε3和ε4。见图2。图3为E 4/4型的5’端正向测序结果扫描图。将所有结果与GeneBank中已知的ApoE基因第4外显子对应部分序列进行比对，多态性位点碱基吻合，分型结果准确。

　　2.3  ApoE基因型与等位基因频率分布  CHD患者中ApoE 3/4基因型和ApoE ε4等位基因频率明显高于健康对照组（P<0.01, P<0.05），OR(Odds Ratio, 优势比也称比值比)值为2.9924，采用MantelHaenszel方法算得95％的可信区间为［1.6508, 5.4242］，使用CochranMantelHaenszel法得到P值为0.0002，表明ε4变异基因和CHD发病显著相关。见表1。

　　2.4  ApoE基因多态性对血脂水平的影响  分析携带和不携带ε4等位基因患者的血脂水平，结果显示携带ε4等位基因者TC、TG、LDLC和AI明显升高（P<0.05或P<0.01）；而HDLC降低，但无统计学差异。表明ε4等位基因具有“升高血脂”的作用，可加重动脉粥样硬化的程度和提高发病风险。见表2。

　　2.5  ApoE基因型与等位基因频率在不同证候中的分布  E 3/4基因型和ε4等位基因频率在痰证（syndrome of phlegm, PS）患者中明显高于瘀证（syndrome of blood stasis, BSS）患者(P<0.05)，而E 3/4基因型在非痰非瘀证患者（syndrome of nonphlegm and nonblood stasis, NPNBS）中的频率则明显高于瘀证和痰瘀互阻证（syndrome of phlegmblood stasis blocking, PBBS）患者(P<0.05)，但未见其在ε4等位基因频率间有统计学差异。见表3。

　　图1  ApoE基因第4外显子目的片段PCR扩增结果电泳图（略）

　　Fig 1  PCR amplification results of ApoE exon 4 target fragment

　　M: PCR marker; 1: PCR products; 2: PCR products

　　图2  ApoE基因第4外显子目的片段PCR产物的HhaI酶切分型结果电泳图（略）

　　Fig 2  HhaI RFLP results of ApoE exon 4 PCR products 大学排名
 
　　M: pBR322Hae Ⅲ marker; 1: Genotype E 3/3; 2: Genotype E 2/3;3: Genotype E 2/4; 4: Genotype E 2/2; 5: Genotype E 3/4;6: Genotype E 4/4

　　图3  ApoE E 4/4基因型样品的DNA测序图谱（略）

　　Fig 3  Sequence mapping of genotype E 4/4 of ApoE

　　表1  ApoE基因型及等位基因频率分布（略）

　　Tab 1  Frequency distribution of ApoE exon 4 genotypes and alleles in CHD group and control group

　　*P<0.05, **P<0.01, vs control group

　　表 2  ε4等位基因对血脂水平的影响（略）

　　Tab 2  Comparison of serum lipid level between patients in CHD group with and without ε4 allele

　　*P<0.05, **P<0.01, vs E 2/2＋E 2/3＋E 3/3 group

　　表3  各证候组ApoE第4外显子基因型和等位基因频率分布（略）

　　Tab 3  Frequency distribution of apoE exon 4 genotypes and alleles in CHD patients with different syndromes

　　*P<0.05, vs PBBS group; △P<0.05, vs BSS group