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高效液相色谱法测定清肝胶囊中龙胆苦苷的实验

2015-06-13 01:21

【摘要】 目的  建立高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷 方法  以C18反相柱为色谱柱，甲醇—水为流动相。检测波长270nm，用乙酸乙酯和甲醇混合液作提取剂。结果  平均回收率为98.38%。r=0.9995,线性关系良好。 结论  此方法灵敏、准确，适用于龙胆苦苷的测定。
【关键词】  高效液相色谱法 清肝胶囊 龙胆苦苷
 
        龙胆为龙胆科植物，其根及根茎含龙胆苦苷，龙胆苦苷具有清肝解毒、消食健胃的功效。用高效液相色谱法（HPLC）测定复方制剂中的龙胆苦苷，其操作步骤简便，样品回收率高，重现性好，结果可靠，现报道如下。
        1  仪器与试药
        1.1 仪器
　　紫外分光光度计（日本岛津UV-260）；高效液相色谱仪（Waters510泵，490紫外检测器，740数据处理仪）；薄层自动涂铺器（瑞士CAMAG）；薄层层析点样台TLC-SP-1（西安市秦西机械厂）；离心机800型（江苏医用设备仪器厂）；微量进样器（上海医用激光仪器厂）。
        1.2 试药
　　中性氧化铝（100～200目）（上海五四试剂厂）；硅胶GF254（青岛海洋化工厂）；龙胆苦苷对照品（中国药品生物制品检定所）；乙酸乙脂、甲醇、氯仿均匀为分析纯（上海试剂一厂）。
        2 含量测定
        2.1   色谱条件 与系统适用性试验
        用十八烷基硅胶为填充剂；甲醇—水（3：7）为流动相；检测波长为270nm。理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于3000。

内容来自www.nseac.com

        2.2   内标溶液的制备
　　精密称取咖啡因适量，加甲醇制成1ml含0.4mg的溶液，即得。
        2.3 测定法
　　精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液。精密量取该溶液和内标溶液各5ml，摇匀，取10ul注入液相色谱仪，记录色谱图；另取本品中含龙胆粉量约0﹒5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇10ml，放置12h，时时振摇，精密加内标溶液2ml，加甲醇至刻度，摇匀，取10ul注入液相色谱仪，按内标法以峰面积计算，即得。
        3 试验方法与结论
        3.1 条件试验
        3.1.1  龙胆苦苷对照品的含量确定和水溶性实验
        3.1.1.1 龙胆苦苷的测定 : 照高效液相色谱法采用Nucleosil C18柱（46cm×0.25cm），精密吸取含量测定项下配制的龙胆苦苷对照品溶液进样，以甲醇—水为流动相，连续重复进样3次，归一化法计算含量。

        3.1.1.2 水溶性实验 ：精密称取龙胆苦苷对照品0.2608g，加水1ml，根据操作规范［１］，可见立即溶解。故认为龙胆苦苷对照品水溶性在易溶范围。
        [SX(]1[]0.2608[SX)]=38.3ml/g
        3.1.2  样品与龙胆苦苷对照品紫外光谱对照取复方制剂样品和对照溶液2.5ml，分别在波长200～400nm间进行扫描。结果表明：二者紫外吸收曲线基本一致，在波长（271±1）nm处均有最大吸收。

        3.1.3   提取溶剂的选择：龙胆苦苷为裂环环烯醚萜单糖苷，极性大。清肝胶囊为复方制剂，成分复杂，提取溶剂的选择会影响下一步的薄层分离。因此，试用了甲醇、丙酮、乙酸乙酯等溶剂提取找出最佳提取溶剂。试验表明，甲醇对龙胆苦苷的提取效率高，同时出提出大量糖类水溶性杂质，影响薄层分离，干扰紫外吸收。而乙酸乙酯虽提取效率较差，但提取的糖类等杂质也较少。因此，采用乙酸乙酯—甲醇（70：10）的比例混合作提取溶媒；既能定量地提取龙胆苦苷，又能尽可能少地提出杂质，在该溶媒条件下的最大吸收波长为270nm。 （转载自中国科教评价网www.nseac.com ）
        3.2  回收率试验