甘草水制广地龙饮片质量标准研究论文(2)

　　广地龙为博罗先锋药业广地龙GAP基地提供，经广东药学院刘基柱副教授鉴定为钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspegillum(E.Pettier)的干燥体;甘草为市售药材，经广东药学院中药学院刘基柱副教授鉴定为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根。炮制品由本实验室加工，标本保存在广东药学院药用植物与中药鉴定学教研室。次黄嘌呤对照品(140661200402)与肌苷对照品(140669200401)均购于中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱醇;水为超纯水;其它试剂为分析纯。

　　高效液相色谱仪(上海天美Organizer LC 2050; UV Detector LC2010;Pump LC2130);DL360A超声波清洗器(上海之信仪器有限公司，59 kHz,250 W); 1013A电热鼓风恒温干燥箱(上海迅能电热设备有限公司)。

　　2 方法与结果

　　2.1 炮制品的制备 将广地龙饮片用10%的甘草水闷透，置炒制容器内，用文火炒干，炒至广地龙表面成棕色，取出，放凉。

　　2.2 性状鉴别 呈薄片状，长3～4 cm，宽约1 cm，边缘略卷。具环节，背部棕褐色至紫灰色，腹部浅黄棕色;生殖带较光亮。体轻，略呈革质，质韧不易折断。气腥，味微甘、咸。

　　2.3 显微鉴别 粉末棕黄色。表皮细胞为黄棕色，细胞界限不明显，有暗棕色的色素颗粒散在。肌纤维多，为透明或淡棕色，直径大约6～28 μm，大多离散，细长，多弯曲，有的局部膨大，明暗相间纹理不明显。刚毛少见，常破碎散在，淡棕色或黄棕色，中部直径大约28～33 μm，先端多钝圆，有的表面可见纵裂纹，偶见皮样纹理。

　　2.4 薄层鉴别 同《中国药典》2005年版“地龙”药材项下[1]方法。

　　2.5 常规检查[1]

　　2.5.1 水分测定 甘草水制广地龙饮片中挥发性成分较少，故采用《中国药典》2005年版一部(附录Ⅸ H第一法)测定。

　　2.5.2 总灰分、酸不溶性灰分测定 按《中国药典》2005年版一部(附录ⅨK)方法测定。

　　2.5.3 浸出物测定 按《中国药典》2005年版一部(附录ⅩA)浸出物测定法测定。包括水溶性浸出物测定和醇溶性浸出物测定。供试品需粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀，醇溶性浸出物测定采用冷浸法,乙醇体积分数为95%。以上常规检查项目结果见表1。根据实验结果分析，建议在制定甘草水制广地龙饮片质量标准时，以含水量不超过5.0%，总灰分不超过10.0%，酸不溶性灰分不超过5.0%，水溶性浸出物不得少于20.0%，醇溶性浸出物不得少于8.0%为宜。表1 甘草水制广地龙饮片常规检查项目结果论文下载

　　2.6 含量测定

　　2.6.1 色谱条件与系统适应性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(ODS睧P,4.6 mm×250 mm, 5 μm,迪马公司);甲醇菜(体积比95:5)为流动相;检测波长为249 nm[5];柱温30 ℃。理论塔板数按次黄嘌呤峰计算，不低于3 800，在此条件下测得次黄嘌呤、肌苷与相邻组分分离度良好。分别精密吸取次黄嘌呤对照品溶液、肌苷对照品溶液与供试品溶液各10 μL，分别进样，记录色谱图，见图1

　　2.6.2 对照品储备溶液的制备 分别精密称取次黄嘌呤对照品和肌苷对照品适量，加流动相配制成1 μg·mL-1 的次黄嘌呤对照品储备溶液、100 μg·mL-1的肌苷对照品储备溶液。

　　2.6.3 供试品溶液的制备[5] 精密称取样品2.0 g，置具塞锥形瓶中，加水50 mL，密塞，浸泡1 h，超声30 min，残渣再加水50 mL提取1次，合并提取液，离心10 min(4 000 r·min-1)。精密量取提取液1 mL，用流动相定容至10 mL，滤过，即得。

　　2.7 方法学考察

　　2.7.1 线性关系考察 分别精密吸取次黄嘌呤对照品储备溶液0.2、0.4、1.2、1.6、2 mL置10 mL量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀;分别精密吸取肌苷对照品储备溶液0.4、0.5、0.6、1.0、1.2、1.5 mL置10 mL量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀。分别取上述溶液各10 μL，进样，按“2.6.1”项下色谱条件进行分析。以质量浓度(ρ)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标,绘制标准曲线，得回归方程:

　　次黄嘌呤A =3×10-6ρ-0.0108，r=0.999 2，进样量在0.020 8～0.208 μg·mL-1范围内线性关系良好。肌苷A = 5×10-5ρ+0.2665，r=0.999 4，进样量在4.004～15.015 μg·mL-1范围内线性关系良好。