正交实验法优选清热利咽胶囊提取工艺研究

【摘要】  目的 考察清热利咽胶囊水煎煮工艺条件。方法 以加水量、煎煮时间和煎煮次数3个因素进行正交实验,以没食子酸含量和浸膏收率为评价指标综合评分,确定清热利咽胶囊的最佳提取工艺条件。结果 清热利咽胶囊的最佳提取工艺为：加10倍量水，煎煮3次，每次1.0小时。结论 清热利咽胶囊提取工艺合理、可行。

【关键词】  清热利咽胶囊 ； 正交实验 ； 提取； 没食子酸； HPLC

Study on Preparation Procedure for Qingre Liyan Capsule with Orthogonal Experiment

    YU Ling瞴ing1 ,ZHANG Dan2  ,HU Hui瞝ing1,LIAN Xiao瞲iao1

    (1.Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610072,China；2.Department of Pharmacy, Luzhou Medical College,Sichuan Luzhou 646000,China） 毕业网 网

    【Abstract】  Objective To investigate the preparation conditions for Qingre Liyan capsule.Methods The orthogonal experiment was carried on with 3 factors,water quantity,the preparation time and the decoction frequeney,and composite grading were measured by the gallic acid content and extraction rate to determine best preparation conditions for Qingre Liyan capsule.Result The best preparation conditions of Qingre Liyan capsule is: 10 times of water quantity,3 times for decoction,1 hours for each time.Conclusion The preparation conditions of Qingre Liyan capsule is reasonable and feasible.

    【Key words】  Qingre Liyan capsule；   orthogonal experiment；   preparation；   gallic acid；   HPLC

　  清热利咽胶囊为临床经验方，由余甘子、桔梗、麦冬等药物组成，具有清热泻火、生津利咽作用，主要用于口干咽燥，咽喉干痒疼痛等症状。根据处方中药物性质，结合生产实际，采用水煎煮法进行提取。拟采用正交实验方法，以没食子酸含量和浸膏收率为评价指标进行综合评分，优选清热利咽胶囊提取工艺。现将研究结果报告如下。

    1  实验材料、试剂和仪器

    材料与试剂  药材购于成都市荷花池中药材市场，经检测符合《中国药典》2005年版一部有关的规定。没食子酸(批号110831200302，供含量测定)，中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

    仪器岛津LC10A高效液相色谱仪； 赛多利斯BP211D电子天平。

    2  实验方法与结果

    2.1  实验设计

    根据处方中药物主要有效成分的性质，选择采用水煎煮提取，并对提取有较大影响的加水量、煎煮时间、 煎煮次数三个因素进行考察，每个因素选择3个水平，用 (L9（34） )正交表安排实验。因素水平见表1.由于余甘子是君药，没食子酸是其中的主要有效成分之一，因此选择没食子酸为主要评价指标，浸膏收率作为辅助评价指标，采用综合评分方法对提取条件进行评价。

    2.2  实验方法

    称取饮片9份，按正交设计方案，进行煎煮提取，浓缩定容至500 ml，备用。表1  实验因素水平表

    2.2.1  浸膏收率的测定［1］  分别精密量取水煎液50 ml 于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴浓缩至干，置烘箱中105℃干燥3 h，取出，置干燥器中冷却30 min，精密称重，计算浸膏收率。

    2.2.2  没食子酸含量测定［2］  ①色谱条件：用18烷基硅烷键合硅胶为填充剂； 乙腈0.1%磷酸（7∶93）为流动相； 检测波长为273 nm； 柱温40℃； 流速1 ml/min； 理论塔板数按没食子酸峰计算不低于2 500.②对照品溶液的制备：取没食子酸对照品，精密称定，加甲醇制成0.04 mg/ml的溶液作为对照品溶液。③供试溶液的制备：分别取正交实验的药液5 ml于25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，振摇均匀，再精密吸取1 ml于10 ml量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。④缺余甘子阴性样品的制备：称取缺余甘子的处方量药材，同上述方法制成余甘子阴性供试溶液。⑤标准曲线制备：取对照品溶液，分别精密吸取1、2、4、6、8、10 ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别进样10 μl，按上述色谱条件测定峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行回归，得线性方程Y=2 011 966.99X+9 713.16，r=0.999 9，结果表明，进样量在0.040～0.400 μg之间呈良好的线性关系。⑥测定：分别精密吸取正交实验样品溶液及对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定没食子酸峰面积，计算含量。

    2.3  实验结果与分析 毕业网 网

    以食子酸的含量与浸膏收率为评价指标，没食子酸的含量代表提取物中有效成分的含量，应作为工艺评价的主要指标，权重系数为0.8； 浸膏收率高低也在一定程度反映提取的效果，特别是大生产中具有意义，故权重系数为0.2.实验结果与数据分析（见表2、3）。

    方差分析结果表明，各因素对提取的影响顺序为：C＞A＞B，表明因素C和A影响较大，即加水量和煎煮次数对提取效果有显著影响，最佳工艺为A3B3C3.由于煎煮时间对提取无显著影响，结合生产实际，提取工艺条件调整为A3B2C3：即加10倍量水，煎煮3次，每次1.0小时。表2  正交实验及实验结果表3  正交实验方差分析

    2.4  验证实验

    根据筛选的工艺条件，做3份平行实验进行验证，结果浸膏收率为28.59 %、29.86 %、27.93 %； 没食子酸的含量为：30.24 mg/g、31.02 mg/g、29.93 mg/g.实验结果可以看出，所筛选的工艺合理、稳定，可行。

    3  小结与讨论

    3.1  采用多指标综合评分方法，确定清热利咽胶囊的提取工艺为：加10倍量水，煎煮3次，每次1.0小时，提取工艺科学、稳定、可行，具有生产可行性。

    3.2  在本复方制剂中对没食子酸的含量测定，曾采用甲醇菜擦姿岬牟煌比例作为流动相进行考察，但基线不稳定，样品分离度差。经过多次实验，最后确定正文中所用的流动相，能很好地分离没食子酸，测定结果准确、可行。

【参考文献】 内容来自www.nseac.com
  ［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典一部［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录×.

［2］ 孙桂梅，吴宏岩，王会平，等．高效液相色谱法测定克银丸中没食子酸含量［J］.中国药业，2006，15（13）：42.